生物TEM透射电镜

如果需要研究样品的内部结构例如细胞器的改变则应选择透射电镜观察

如果需要研究样品表面的形态结构如细胞的外形、细胞的生长形态等则应选择扫描电镜观察

一、生物电镜设备介绍

设备一：生物透射电镜

型号：JEM-1400Flash

制造厂家：JEOL公司

技术参数：

1.TEM分辨率 (nm)：0.2 

2.加速电压：10 ～ 120kV

3.倍率 （TEM）：×10～1200000 

4.样品倾斜角*1：Tilt-X  ±70°(高倾斜样品杆)

设备二：生物钨灯丝扫描电镜

型号： S-3000N

制造厂家：HTACHI公司

技术参数：

1.点分辨率：6nm

2.最大放大倍数：20万倍

3.最大加速电压：30KV

设备三：生物冷场发射扫描电镜

型号： REGULUS8220

制造厂家：HTACHI公司

技术参数：

1.二次电子分辨率：0.7 nm（加速电压 15 kV）；0.9 nm（着陆电压 1 kV）*2

2.加速电压：0.5~30 kV

3.着陆电压：0.01~20 kV

4.倍率：20~2000000倍*3

5.马达台控制 5轴自动

电镜配套冷冻传输系统，鲜活样品直接冷冻条件下切片检测

二、生物电镜检测流程 

（一）选择电镜

1、如果需要研究样品的内部结构例如细胞器的改变则应选择透射电镜观察

2、如果需要研究样品表面的形态结构如细胞的外形、细胞的生长形态等则应选择扫描电镜观察

生物样品取材、固定、保存

1、透射电镜样品:

1) “快速”：指尽量在活体条件下取材或动物断血后2分钟内取材并迅速将组织放入电镜专用3.5%戊二醛固定液内(不可用酒精或消毒级戊二醛固定)并于4℃冰箱内保存切忌样品结冰。

2) “准确”：指取材部位要准确。取材的器械要锋利尽量减少对组织的牵拉和挤压。

3) “体积小、低温”：指组织厚度不应大于3mm取材温度最好控制在4℃左右进行操作。

2、扫描电镜样品

1) 取材时还应尽量保护观察面避免用镊子夹持观察区域在固定前通常应用适当的清洗液清洗样品表面的杂质灰尘粘液等附着物。

2) 常用的清洗波有蒸馏水、生理盐水、各种缓冲液或含酶的清洗液。

3) 样品取好后放入3.5%戊二醛固定液内固定保存在4℃冰箱中，切忌样品结冰。

（二）流程

1、透射电镜

取样——3.5%戊二醛前固定；1%鐵酸后固定——酒精、丙酮逐级梯度脱水——Epon-618渗透、包理——半薄切片——光镜选区定位——修块——超薄切片机切片——柠檬酸铅、醋酸铀双染色——透射电镜观察——摄片——分析+报告

2、扫描电镜样品

1) 取材——清洗——固定——冷冻——SEM观察（冷冻电镜）

2) 取材——清洗——固定——脱水——干燥——镀膜——SEM观察（常规检测）

3) 取材——清洗——固定——组织导电处理——脱水——SEM观察（特殊样品，例如外泌体）

1) “快速”：指尽量在活体条件下取材或动物断血后2分钟内取材并迅速将组织放入电镜专用3.5%戊二醛固定液内(不可用酒精或消毒级戊二醛固定)并于4℃冰箱内保存切忌样品结冰。

2) “准确”：指取材部位要准确。取材的器械要锋利尽量减少对组织的牵拉和挤压。

3) “体积小、低温”：指组织厚度不应大于3mm取材温度最好控制在4℃左右进行操作。

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